Se prepararon medios líquidos y sólidos para la siembra de microorganismos provenientes de un caldo con crecimiento. Durante la siembra en el medio sólido se emplearon técnicas como, la de incorporación de medio, la extensión en placas, y el aislamiento por estriado, observándose crecimiento en todos los casos. Sin embargo, solo se logró aislar el microorganismo en la siembra por estriado, señalando dicha técnica como la más efectiva para este fin. Por otra parte, para estudiar la morfología de las bacterias se prepararon distintas muestras, una húmeda en la cual solo se pudo apreciar la movilidad del microorganismo sin gran calidad ni contraste, y otras en seco preparando un frotis en el cual se fijaba la muestra al portaobjetos aplicando calor. En las preparaciones fijadas se usaron las tinciones de Gram, permitiendo distinguir entre bacterias gram positivas y gram negativas, la tinción simple y las tinciones de cápsula y esporas.

La microbiología es el estudio de los microorganismos, un grupo amplio y diverso de organismos microscópicos que existen como células aisladas o asociadas [1]. Inventos como el microscopio, los medios de cultivo, tinciones, pruebas y recuentos han sido pilares del desarrollo de la microbiología como ciencia [2], razón por la cual es necesario que se adquieran destrezas y que se conozcan los métodos básicos para después entrar en el campo de la investigación experimental. En este sentido, lo principal a tomar en cuenta para empezar a estudiar microorganismos es el medio en el que estos viven, crecen, o se piensa sembrar, llamado medio de cultivo, el cual es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de microorganismos [3]. Estos medios pueden ser de diferente composición, según las necesidades nutricionales del organismo que se busca crecer o aislar. En todo caso, se pueden clasificar por su estado como medios sólidos, y medios líquidos, según contengan o no agar respectivamente. Dado que los microorganismos son ubicuos (se pueden detectar casi en cualquier hábitat), los medios de cultivo y los instrumentos deben ser esterilizados antes de su empleo [3]. Esto con la finalidad de evitar contaminaciones al trabajar con un cultivo de microorganismos puro. En función de esto existen distintos métodos para llevar a cabo la esterilización, entendiéndose esta como la destrucción completa de todos los microorganismos, incluidas formas resistentes como esporas bacterianas, virus sin envoltura y hongos [4].

Otro aspecto clave para entender estos organismos es su caracterización en base a su morfología o fisiología, para lo cual es necesaria su observación. Es por ello que el microscopio se utiliza de forma rutinaria, ya que proporciona importante información para la identificación temprana y definitiva de los microorganismos [5]. Si bien durante la observación microscópica de muestras vivas o húmedas no es necesario tratamiento previo, en la mayoría de los casos se requiere usar tinciones. La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno empleando colorantes, y por lo tanto mejorando la imagen observada [6].

En el presente estudio, se describe la preparación de algunos tipos de medios de cultivo, así como la comparación entre los métodos usados para su esterilización y las distintas técnicas empleadas para sembrar. Son también descritos algunos procedimientos para teñir preparaciones e identificar algunas muestras mediante la observación microscópica.

Se pesaron 0,31 g de caldo nutritivo (se requieren 0,8 g de este para preparar 100 ml de medio) en una balanza de precisión (Ohaus Adventurer Pro) y se traspasaron a una fiola agregándole 40 ml de agua destilada, agitando la mezcla hasta su homogenización. Luego se colocaron 10 ml de la mezcla (medio líquido) en tres tubos de ensayo distintos A, B y C respectivamente. Los 10 ml restantes se guardaron para su posterior utilización.

Un total de 0,6 de agar cuenta estándar (se requieren 2,35 g de agar cuenta estándar por cada 100 ml de agua destilada) fueron pesados en una balanza de precisión, los cuales se traspasaron a una fiola a la que se le agrego 25 ml de agua destilada.

El tubo A se colocó en un autoclave a 121 ºC por 15 min; el B se dejó en baño María a aproximadamente 100 ºC por 15 min; y el C se dejó a temperatura ambiente (tubo control). Los 10 ml restantes de la mezcla se traspasaron por filtrado a un tubo D ya esterilizado, mediante el uso de un filtro de membrana. El medio sólido fue también colocado en el autoclave a 121 ºC por 15 min.

Con una pipeta estéril se tomaron 200 μl de muestra de un caldo nutritivo con crecimiento de organismos agregándolo a 20 ml de otro caldo nutritivo previamente esterilizado.

Con un asa de platino esterilizada (calentada con el mechero) se tomó una porción de muestra de un caldo con crecimiento bacteriano, y se introdujo en un medio de agar inclinado haciendo en primera instancia una pequeña incisión en la superficie inferior del agar y después con un movimiento en zigzag se procedió a pasar el asa desde la parte inferior hasta la punta de la superficie del agar.

Se tomó con una pipeta estéril 1ml de caldo con crecimiento y se colocó en el centro de una placa estéril agregándole posteriormente 25 ml de agar cuenta estándar esterilizado (aun liquido con una temperatura aproximada a los 37-40 ºC), agitando luego la placa de la siguiente forma:

Con una pipeta estéril se tomaron 0,1 ml de la muestra de caldo con crecimiento, agregándolos en el centro de una placa con agar. Luego con un rastrillo previamente esterilizado con el mechero se procedió a distribuir uniformemente la muestra por toda la superficie del agar.

Con un asa de platino esterilizada, se tomó una muestra de un caldo con crecimiento, pasándolo por una placa sobre la superficie del agar sub-dividido en 3 o 4 cuadrantes, siguiendo este proceso:   1- se realizó movimientos de zigzag (o cualquier otro) sembrando todo lo posible la muestra por el primer cuadrante;

Todas las preparaciones realizadas fueron observadas al microscopio empleando el objetivo de inmersión, con la excepción de la preparación húmeda que uso 4000x de aumento.

Se agregó 1 gota de cultivo sobre un portaobjetos y se cubrió con el cubreobjetos.

Con un asa estéril se colocó 1 gota de la muestra sobre el portaobjetos extendiéndola por toda el área previamente marcada con ayuda de un marcador indeleble en la parte inferior de este. Dejándose secar; una vez seco se pasó 3 veces por la llama del mechero para fijar la muestra.

Se cubrió un frotis con cristal violeta por 5 min, luego se lavó con agua y se dejó secar. Otro frotis fue cubierto con safranina y también se dejó actuar por 5 min.

1-Se cubrió la preparación con cristal violeta 5 min y se lavó con agua;