DETERMINACIÓN CUALITATIVA DE MARIHUANA POR INMUNOENSAYO EN MUESTRAS DE ORINA.

Amigos stemianos, un afectuoso saludo para los que hacen vida en este diverso ecosistema, hoy les escribo desde mi experiencia como profesora de la cátedra de Toxicología y Control de Drogas para la carrera de Licenciatura en Bioanálisis, con la intención de abordar un tema, por demás interesante desde el punto de vista de una práctica del octavo semestre del Laboratorio de Toxicología y Control de la Universidad de Oriente, que a su vez puede ser entendido de manera clara por cualquiera que muestre su interés en esta área del conocimiento que incluye drogas de abuso tan populares como la marihuana, aún más en la actualidad noticiosa en la cual, el consumo de marihuana desde el punto de vista recreativo y medicinal ha sido discutido y criticado desde diversos puntos de vista alrededor del mundo.

El objetivo principal de este post es contribuir a la difusión del conocimiento científico, como se estila en @stem-espanol, ahora en el área de Toxicología y Control de drogas abordando, en este caso, los fundamentos básicos relacionados con la determinación cualitativa de marihuana en orina humana por la técnica de inmunoensayo, como una opción válida que (llevada a cabo por personal especializado), contribuya con el diagnóstico clínico sospechado en caso de una posible intoxicación por marihuana.

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Generalidades acerca de la Marihuana

Marihuana: ¿Cómo es? ¿Cómo se consume? ¿Cuál es su efecto en el organismo?

Antes de empezar, es importante conocer un poco más sobre la Marihuana conocida comúnmente como “hierba”, “porro”, “Maria Juana”, y cientos de nombres que van cambiando según el argot popular, la nación y la cultura.

1.-¿Cómo es?

La Marihuana se conoce filogenéticamente como Cannabis sativa, gracias a la clasificación de Linneo Fuente y es una planta proveniente de Asia Central con características macroscópicas tales como tallo alto y hojas verde grisáceas, desde el punto de vista microscópico se encuentran estructuras botánicas como pelos cistolíticos, pelos glandulares, cañamones o semillas y resina.

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2.- ¿Cómo se consume y cuáles son sus efectos en el organismo?

Desde el punto de vista medicinal, la marihuana es usada de múltiples formas, desde tomada en un simple Té para evitar el insomnio o los efectos eméticos de la quimioterapia (evitando los vómitos) hasta inhalada, fumada o colocada directamente como apósitos para para disminuir dolores reumáticos, puede ser usada contra el glaucoma, así como también como estimulante del apetito en pacientes con Sida, así mismo es producida comercialmente por la industria farmacéutica para su uso en pacientes pediátricos con diferentes condiciones neurológicas como las convulsiones recurrentes.

Por otra parte se han reportado casos de intoxicaciones accidentales por Cannabis sativa en niños que probaron pasteles preparados con esta droga Fuente

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Tal como lo refiere Wikipedia Fuente ,El principal ingrediente psicoactivo de la marihuana es el delta-9-tetrahidrocannabinol, o THC, a veces llamado delta-9-THC bajo un sistema de denominación distinto. De cualquier modo, otros cannabinoides también tienen propiedades medicinales y/o psicoactivas. Se encuentra en mayor proporción en el cañamon o fruto de la planta cannabis sativa, de donde se han aislado más de 400 tipos de cannabinoides. La estructura tridimensional del TCH se muestra a continuación, para una mejor visualización de la molécula.

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Técnica de Inmunoensayo para la identificación de Marihuana:

Es un inmunoensayo cromatográfico, rápido y cualitativo de un solo paso para la detección de tetrahidrocannabinol en una muestra de orina. Este método se ha desarrollado para la determinación del THC en la orina para concentraciones superiores a 50 ng/ml.

Principio:

La prueba consiste en una cromatografía absorbente en la cual la droga o sus metabolitos en la muestra compiten con un conjugado de la droga inmovilizado en la membrana porosa en los sitios libres del anticuerpo. Como la muestra sube a través del dispositivo absorbente, los anticuerpos conjugados se unen en los sitios libres de droga formando un complejo Ag-Ac (antígeno-anticuerpo). En concordancia con los estudios llevados a cabo por National Institute on Drug Abuse. Fuente

Este complejo compite con el conjugado inmovilizado del antígeno en la zona de reacción positiva (T). Los conjugados no unidos con el reactivo en la zona de control (C), producen un banda de color rosa, indicando que el dispositivo funcional correctamente. Si el nivel de detección de la droga es inferior a 50 ng/ml se forman las dos bandas color rosa, una en la zona de control y otra en la zona de prueba, de lo contrario únicamente aparece una banda en la zona control.

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Materiales :

Para la realización de esta práctica se requiere el kit para la determinación de drogas de abuso (THC), que puede ser en casette o en tira (dependiendo de la presentación comercial), un gotero y la muestra de orina tomada en un recipiente de plástico estéril.

Procedimiento:

1. Equilibrar los componentes de la prueba con la temperatura ambiente antes de realizar el ensayo.

2. Retirar el dispositivo de prueba, colocarlo en una superficie plana y llenar el gotero con la muestra de orina y dispersar tres gotas sobre la placa.

3. Cuando son tiras, estas se sumergen dentro de la muestra de orina.

4. Esperar hasta que aparezca la o las líneas rosadas. El resultado se debe leer a los 5 min.

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Interpretación de los Resultados:

Positivo:

Aparece únicamente una banda rosada en la zona de control(C). Un resultado positivo indica que los niveles de THC están por encima del nivel de detección de concentración (50 ng/ml).

Negativo:

Aparecen dos bandas rosadas; una en la zona de control(C) y la otra en la zona de prueba (T). Un resultado negativo indica que los niveles de THC están por debajo del nivel de detección de concentración (50 ng/ml).

Inválido:

Cuando no aparecen bandas visibles en ninguna zona, o cuando hay una banda visible en la zona de prueba pero no en la zona de control. Esto indica que la prueba es inválida y se recomienda repertirla.

Algunas consideraciones:

El uso de drogas es un tema de gran importancia desde el punto de vista clínico, aún más cuando el desenvolvimiento de los consumidores puede alterar (ya sea de forma benéfica) su calidad de vida, así mismo se debe tomar en cuenta que el abuso, puede acompañarse de una serie de síntomas característicos del tipo de intoxicación correspondiente, por lo cual éstos correlacionados con pruebas de laboratorio confiables y oportunas puede ayudar al diagnóstico y tratamiento.

Es importante destacar que la determinación de THC en orina por inmunoensayo es una técnica cualitativa confiable y de uso rutinario en laboratorios de Toxicología Clínica, debido a la gran ventaja que representa la facilidad de obtención de la muestra de orina (en comparación con otros métodos de recolección de muestras biológicas) puede ser procesada rápidamente, sin embargo se recomienda que “a posteriori” estos resultados pueden ser confirmados con pruebas cuantitativas aún más específicas, sobretodo por la implicación clínica y legal que puede tener sobre la vida de paciente.

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Referencias:

1. Albert, L. (1997). Introducción A La Toxicología Ambiental. México: Centro. Panamericano De Ecología Humana Y Salud.

2. Barnett, G.; Licko, V.; And Thompson, T. Behavioral Pharmacokinetics of Marijuana. Psychopharmacology 85:51-56, 1985.

3. Cordova, D. Toxicología, Editorial ed. Manual Moderno, Cuarta edición. Colombia 2001.

4. Hawks RL, Chiang CN., Eds. Urine Testing For Drugs Of Abuse. Rockville: Departament Of

5. Health And Human Services, National Institute On Drug Abuse, 1986.

6. Klaassen, c. D. (2005).- Manual de Toxicología: La Ciencia Básica de los Tóxicos. Ed. Mcgraw-Hill interamericana:6ª ed. México

7. Mcbay AJ. Drug-Analysis Technology-Pitfalls and Problems of Drug Testing. Clin. Chem. 1987 Oct., 33(11 Suppl): 33B-40B.

8. National Institute On Drug Abuse,73 Research Monograph Series.

9. Repetto, M. (1995).- Toxicología avanzada. Ed. Díaz De Santos, S.A. Madrid.

10. Repetto, M. (1997).- Toxicología fundamental. Ed. Díaz De Santos, S.A. Madrid.

11. Urine Testing For. Drugs of Abuse. Editors: Richard L. Hawks, Ph.D. C. Nora Chiang, Ph.D. Division of Preclinical Research. National Institute on Drug Abuse.

12. Urine Testing For. Drugs Of Abuse. Editors: Richard L. Hawks, Ph.D. C. Nora Chiang, Ph.D. Division of Preclinical Research. National Institute on Drug Abuse.

13. http://es.wikipedia.org/wiki/Cannabis_

14. https://es.wikipedia.org/wiki/Tetrahidrocannabinol

15. http://www.labomed.com.ve/pdf/Li/LI-0018.pdf

16. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/f/f9/Cannabis_sativa_